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反相是應用最廣的HPLC保留方式,但極性很大的化合物常常不能充分保留在低百分比有機相中,甚至不能保留在100%含水流動(dòng)相中。對于含有相同組分的樣品,正相洗脫順序與RPC中的洗脫順序正好相反。盡管正相LC在傳統上采用非極性有機流動(dòng)相和硅固定相,但如今,多數正相分離法均采用含水有機流動(dòng)相和極性較強的鍵合固定相。該HPLC方式目前普遍稱(chēng)為HILIC,即親水作用色譜法。 如果采用強極性鍵合相(如TSKgel Amide-80),正相或親水作用色譜法(HILIC;見(jiàn)參考資料)可改善極性化合物的保留行為,其保留機理是使用乙腈與乙酸銨緩沖液的混合流動(dòng)相。與反相保留行為相反,在HILIC中,通過(guò)增加乙腈百分比可更長(cháng)時(shí)間地保留樣品中的極性成分。
陽(yáng)離子交換色譜法采用含有硫離子的強陽(yáng)離子或含有羧甲基(CM)官能團的弱陽(yáng)離子交換劑??购怆x子(常為 Na+)維持電中性。 在離子交換色譜法中,流動(dòng)相緩沖劑的 pH 值必須在電荷分子 pI 值或 pKa 值與固定相上電荷基團的 pKa 值之間。例如,在陽(yáng)離子交換色譜法中, pI 值為 8.2 的分子在 pH 6.0 的流動(dòng)相緩沖劑中溶解,同時(shí)固定相 pKa 值為 1.2。
在疏水作用色譜法(HIC)中,弱非極性固定相與高濃度的鹽的水溶液同時(shí)使用。該方法主要通過(guò)減少鹽的濃度來(lái)分離蛋白。 在反相色譜中,蛋白通過(guò)與填料上烷基或芳基相互作用保留下來(lái)。 不同于反相色譜,在疏水反應色譜中上述官能團的密度較低,且蛋白分子只在一個(gè)或少數幾個(gè)位置上吸附。 鹽濃度較高時(shí)會(huì )產(chǎn)生吸附作用,但若加入低百分比濃度的有機溶劑降低鹽濃度,則會(huì )產(chǎn)生脫附作用。 盡管二者均以疏水作用為基礎,但HIC分離的選擇性明顯不同于反相LC。 相對于RPC,HIC的最高容量較低,但其優(yōu)勢在于:流動(dòng)相條件(主要是含水流動(dòng)相)通常不會(huì )破壞高階蛋白質(zhì)結構。
TSKgel SuperIC-Cation HS II 為超高速陽(yáng)離子分析用色譜柱。TSKgel SuperIC-CR 為高性能陽(yáng)離子分析用色譜柱。TSKgel IC-Cation I/II HR 為陽(yáng)離子分析用色譜柱。TSKgel IC-Cation 為陽(yáng)離子分析用色譜柱。TSKgel IC-Cation-SW 為陽(yáng)離子分析用色譜柱。TSKgel SuperIC-A/C 是陰離子陰、陽(yáng)離子同時(shí)分析用色譜柱。