質(zhì)粒DNA色譜分析、分離的推薦選擇!
發(fā)布時(shí)間:
2022-10-20 11:15
質(zhì)粒DNA色譜分析、分離的推薦選擇!
使用TSKgel和TOYOPEARL?助力質(zhì)粒載體關(guān)聯(lián)治療藥物的研發(fā)
盡管在新品快訊(TSKgel?、TOYOPEARL?)No. 15中,介紹了在分析、分離純化病毒載體時(shí)使用了分析用TSKgel色譜柱以及制備用填料TOYOPEARL的論文和技術(shù)資料,但也收到了很多在分析、分離純化質(zhì)粒DNA時(shí)的應用實(shí)例報告。目前整理的論文和技術(shù)資料如下?!?/p>
● 分析、分離質(zhì)粒載體時(shí)使用的層析分離模式
分離模式 |
分離方法 |
分離機理 |
去除雜質(zhì) |
純化步驟 |
備注 |
尺寸排阻色譜(SEC) |
等度分離 |
分子尺寸的差異 |
延遲洗脫 |
初期粗純 |
樣品加載量少, |
陰離子交換色譜(AIEC) |
吸附/梯度洗脫 |
電荷的差異 |
流穿或梯度 |
捕獲 |
可以分離質(zhì)粒異構體, |
疏水色譜(HIC) |
流穿 |
疏水性的差異 |
疏水性的差異 |
捕獲 |
與AIEC相比, |
Ref.: S. Palmieri et al., BioProcess International, 2011, Lonza webinar, modified
● 使用TSKgel和TOYOPEARL分析、分離質(zhì)粒載體的實(shí)例(文獻、技術(shù)資料)
年 |
分離模式 |
色譜柱 |
目標、關(guān)鍵詞 |
論文標題 |
2008 |
SEC, IEC, HIC |
TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL, DNA-NPR?, Butyl-NPR |
質(zhì)粒DNA |
Characterization of Plasmid DNA Samples by Chromatographic Methods |
2007 |
IEC |
TSKgel DNA-NPR |
質(zhì)粒DNA |
Separation of topological forms of plasmid DNA by anion-exchange HPLC: Shifts in elution order of linear DNA |
2005 |
SEC |
TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL |
質(zhì)粒DNA |
High-speed chromatographic purification of plasmid DNA with a customized biporous hydrophobic adsorbent |
2004 |
IEC |
TSKgel DNA-NPR |
質(zhì)粒DNA |
Effective and robust plasmid topology analysis and the subsequent characterization of the plasmid isoforms thereby observed |
2019 |
AFC |
精氨酸固定化 |
超螺旋質(zhì)粒DNA |
Effect of Chromatographic Conditions on Supercoiled Plasmid DNA Stability and Bioactivity |
2005 |
HIC |
Butyl-650M |
質(zhì)粒DNA |
Improved downstream process for the production of plasmid DNA for gene therapy |
使用TSKgel陰離子交換色譜柱(AIEC)分離質(zhì)粒載體的實(shí)例
色譜柱:TSKgel DNA-NPR (2.5 μm, 4.6 mm ID × 7.5 cm)
洗脫液: 緩沖溶液A:20 mmol/L Tris-HCl (pH 9.0)
緩沖溶液B:含有1 mol/L NaCl的緩沖溶液A
緩沖溶液B:從50%到65%的10 CV的線(xiàn)性梯度
流速:1 mL/min
檢測:UV (260 nm)
樣品:PUC19 質(zhì)粒
在純化質(zhì)粒DNA(載體)時(shí),除了需要去除混入的宿主的基因組DNA和RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)以外,還需要去除質(zhì)粒DNA的立體異構體Open circular(oc-)體、Linear體。只純化Supercoiled(closed circular: cc-)體。
● 質(zhì)粒載體的純化步驟示例
下述層析步驟組合適用于質(zhì)粒DNA的純化工藝。
· SECà混合模式層析(Thiophilic Interaction Chromatography)àAIEC(A公司)
· HICàAIECàSEC(B公司)
· AIECàHIC(C公司)
· HIC(流穿:FT)àHIC(D公司)
· 其他:固定化金屬螯合親和層析(IMAC)
羥基磷灰石層析
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2009-03-02
為答謝新老客戶(hù)對綠百草公司的厚愛(ài),從2005年11月15日至2006年1月31日綠百草公司將對世界著(zhù)名色譜品牌COSMOSIL的幾款常用色譜柱(進(jìn)口原裝)進(jìn)行優(yōu)惠銷(xiāo)售活動(dòng)