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質(zhì)粒DNA色譜分析、分離的推薦選擇!


發(fā)布時(shí)間:

2022-10-20 11:15

  質(zhì)粒DNA色譜分析、分離的推薦選擇!

  使用TSKgel和TOYOPEARL?助力質(zhì)粒載體關(guān)聯(lián)治療藥物的研發(fā)

  盡管在新品快訊(TSKgel?、TOYOPEARL?)No. 15中,介紹了在分析、分離純化病毒載體時(shí)使用了分析用TSKgel色譜柱以及制備用填料TOYOPEARL的論文和技術(shù)資料,但也收到了很多在分析、分離純化質(zhì)粒DNA時(shí)的應用實(shí)例報告。目前整理的論文和技術(shù)資料如下?!?/p>

  ● 分析、分離質(zhì)粒載體時(shí)使用的層析分離模式

分離模式

分離方法

分離機理

去除雜質(zhì)

純化步驟

備注

尺寸排阻色譜(SEC)

等度分離

分子尺寸的差異
(質(zhì)粒分子較大,在排阻V0附近洗脫)

延遲洗脫

初期粗純
精制

樣品加載量少,
難以規模放大

陰離子交換色譜(AIEC)

吸附/梯度洗脫

電荷的差異
(質(zhì)粒帶高負電荷)

流穿或梯度
(質(zhì)粒異構體分離)

捕獲
中間步驟
精制

可以分離質(zhì)粒異構體,
但條件優(yōu)化有些復雜

疏水色譜(HIC)

流穿
吸附/梯度洗脫

疏水性的差異

疏水性的差異
(質(zhì)粒異構體分離)

捕獲
中間步驟

與AIEC相比,
吸附載量較低

  Ref.: S. Palmieri et al., BioProcess International, 2011, Lonza webinar, modified

  ● 使用TSKgel和TOYOPEARL分析、分離質(zhì)粒載體的實(shí)例(文獻、技術(shù)資料)

分離模式

色譜柱

目標、關(guān)鍵詞

論文標題

2008

SEC, IEC, HIC

TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL, DNA-NPR?, Butyl-NPR

質(zhì)粒DNA

Characterization of Plasmid DNA Samples by Chromatographic Methods

2007

IEC

TSKgel DNA-NPR

質(zhì)粒DNA

Separation of topological forms of plasmid DNA by anion-exchange HPLC: Shifts in elution order of linear DNA

2005

SEC

TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL

質(zhì)粒DNA

High-speed chromatographic purification of plasmid DNA with a customized biporous hydrophobic adsorbent

2004

IEC

TSKgel DNA-NPR

質(zhì)粒DNA

Effective and robust plasmid topology analysis and the subsequent characterization of the plasmid isoforms thereby observed

2019

AFC

精氨酸固定化
AF-Epoxy-650M

超螺旋質(zhì)粒DNA

Effect of Chromatographic Conditions on Supercoiled Plasmid DNA Stability and Bioactivity

2005

HIC

Butyl-650M

質(zhì)粒DNA

Improved downstream process for the production of plasmid DNA for gene therapy

  使用TSKgel陰離子交換色譜柱(AIEC)分離質(zhì)粒載體的實(shí)例

綠百草科技

  色譜柱:TSKgel DNA-NPR (2.5 μm, 4.6 mm ID × 7.5 cm)

  洗脫液: 緩沖溶液A:20 mmol/L Tris-HCl (pH 9.0)

  緩沖溶液B:含有1 mol/L NaCl的緩沖溶液A

  緩沖溶液B:從50%到65%的10 CV的線(xiàn)性梯度

  流速:1 mL/min

  檢測:UV (260 nm)

  樣品:PUC19 質(zhì)粒

  在純化質(zhì)粒DNA(載體)時(shí),除了需要去除混入的宿主的基因組DNA和RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)以外,還需要去除質(zhì)粒DNA的立體異構體Open circular(oc-)體、Linear體。只純化Supercoiled(closed circular: cc-)體。

  ● 質(zhì)粒載體的純化步驟示例

綠百草科技

  下述層析步驟組合適用于質(zhì)粒DNA的純化工藝。

  · SECà混合模式層析(Thiophilic Interaction Chromatography)àAIEC(A公司)

  · HICàAIECàSEC(B公司)

  · AIECàHIC(C公司)

  · HIC(流穿:FT)àHIC(D公司)

  · 其他:固定化金屬螯合親和層析(IMAC)

  羥基磷灰石層析

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