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TSKgel色譜柱檢測蛋白質(zhì)上應用

發(fā)布時(shí)間：

2022-10-20 11:16

　　關(guān)于蛋白的HPLC方法的分析檢測，TSKgel色譜柱產(chǎn)品及應用中最熟悉的莫過(guò)于SW/SWXL系列的產(chǎn)品了。

　　蛋白制品的生產(chǎn)過(guò)程中，尤其是基因重組蛋白制品/藥物，由于上、下游工藝的不同，以及工藝過(guò)程中的酶解作用、表達缺陷、氧化、變性、聚合、糖基化、磷酸化/脫磷酸化、脂質(zhì)化、甲基化、酰胺化等各種因素的發(fā)生，從而導致過(guò)程產(chǎn)品或最終產(chǎn)品中除目標蛋白外，會(huì )存在微量的氨基酸序列異構體、多聚體、蛋白片段、帶電或空間異構體、糖基化程度不同等的多種雜質(zhì)。

　　過(guò)去，我們很熟悉使用SEC（分子尺寸排阻色譜）進(jìn)行蛋白多聚體、蛋白片段的HPLC分析方法。然而，為了更好地了解和控制產(chǎn)品的質(zhì)量，并由品質(zhì)管理結果指導工藝生產(chǎn)和

　　工藝改進(jìn)，現行的、可用于蛋白（如單克隆抗體產(chǎn)品）檢測的HPLC分析方法已經(jīng)有很多選擇了。反過(guò)來(lái)講，僅僅使用SEC-HPLC分析方法顯然是不夠的。對于蛋白（當然也包括多肽）產(chǎn)品的過(guò)程質(zhì)量控制，或者最終產(chǎn)品的品質(zhì)控制，目前HPLC分析方法的目的及其應用主要歸納如下。

　　

　　1、多聚體及蛋白片段的分析

　　多聚體容易引起過(guò)敏反應。蛋白間的相互作用、相對苛刻的層析純化條件（如較低的酸性pH條件下）等原因會(huì )引起蛋白的聚集反應。另一方面，蛋白酶的存在等會(huì )導致蛋白的降解從而會(huì )造成低分子蛋白片段的存在。常見(jiàn)的也是相對比較方便、直觀(guān)的HPLC分析方法為SEC（分子尺寸排阻色譜）-HPLC方法。主峰（一般為蛋白的單體;Monomer）前的為二聚體和多聚體，主峰后的是分子量（分子空間尺寸）較小的蛋白片段。我公司的TSKgel G2000SWXL常用于小蛋白、多肽的多聚體和片段檢測；TSKgel G3000SWXL常用于大蛋白的多聚體和片段檢測。如果追求分辨率，還可以考慮使用粒徑更小的填料裝填的色譜分析柱（如TSKgelSuperSW2000, SuperSW3000色譜柱）。

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